生物样本保藏技术解析

传代培养保藏法

传代培养保藏法是生物样本的一种简单短期保藏手段，宛如将细菌放在“旅馆”中，定期为其更换环境。这一方法通过将菌种接种于固体斜面培养基上，并置于4℃冰箱中保存。然而，这种保藏方式有效期较短，细菌在这样“旅馆”中容易发生变异，并可能遭受污染。普通细菌的保存时间约为1个月，而假单胞菌则需要每2周便更换一次“房间”。

液体石蜡覆盖保藏法

此方法为细菌“穿上雨衣”，从而隔绝空气，防止水分蒸发。将液体石蜡注入斜面培养物中，让细菌在保卫下静静地“休眠”，可将保藏时间延长至1至2年，某些霉菌、放线菌及芽孢细菌的保藏时间甚至可以达到2年以上。

载体保藏法

在载体保藏法中，细菌仿佛坐在“沙发”上被风干。将细菌吸附于土壤、沙子、硅胶或滤纸等“小沙发”上，再进行干燥处理。这种方法尤其适用于能形成芽孢或孢子的细菌，其保藏时间可达2年。

冷冻保藏法

冷冻保藏法通过低温减缓细菌的新陈代谢，犹如为其开启“冰箱”。常见的保存温度有-20℃、-80℃以及液氮（-196℃）保存方式。使用甘油管冷冻保藏法，将菌种与甘油保护剂混合，可以保藏数年，适用于大多数微生物。

冷冻干燥保藏法

该方法通过在极低温度下快速冷冻细菌，随后在减压下驱赶水分，相当于为细菌进行“真空包装”。

活化方法一览

传代培养保藏法的活化

从斜面培养基中挑取少量菌体，转接到新鲜培养基，仿佛为细菌更换了一个“新家”。通常需进行2-3次连续传代，即可恢复其活力。

液体石蜡覆盖保藏法的活化

挑取少量菌体接种到适宜的新鲜培养基，经过生长繁殖后再转接一次，细菌便会“满血复活”。

载体保藏法的活化

从载体中取出少量菌体，转接至合适的培养基进行培养。例如，沙土管中保藏的菌种，可取些沙土颗粒于合适的斜面培养基上，长出菌落后再次转接。

冷冻保藏法的活化

将冻存管从冷藏设备中取出，立即放入38℃-40℃的水浴中快速复苏并轻轻摇动，直至内部除冰。随后，将内容物移至适宜的培养基上进行培养。

冷冻干燥保藏法的活化

首先用75%酒精擦拭安瓿顶部，然后加热使其破裂。用无菌水或培养液溶解菌块后，转移至新鲜培养基中进行适温培养。